Cromatografias e Eletroforese

A cromatografia de afinidade é usada para isolar um único composto de uma mistura complexa, desenvolvida durante os anos 60-70, refere-se originalmente ao uso de ligantes naturais imobilizados, que interagem especificamente com uma proteína. O ligante é imobilizado em uma partícula que pode ser empacotada em uma coluna. A amostra contendo a proteína é passada pela coluna e a proteína específica interage com o ligante ficando retida, enquanto as outras proteínas permanecem na fase móvel. Após tudo ter sido lavado, o soluto aderido é eluído mudando-se as condições, como o pH ou a força iônica para enfraquecer sua ligação. A cromatografia por afinidade é aplicável especialmente à bioquímica e está baseada nas interações específicas entre as enzimas e os substratos, anticorpos e antígenos ou receptores e hormônios. Algumas das moléculas mais usadas são: Enzimas (utiliza a especificidade de uma enzima pelo seu substrato, coenzima ou inibidor), anticorpos (geralmente o antígeno é ligado ao suporte e usado para purificar anticorpos) e receptores (podem ser purificados utilizando seus hormônios específicos).

Técnicas de afinidade fazem uso, em geral, de uma interação bioespecífica que resulta em uma mudança nas propriedades da proteína, de tal forma que ela possa ser separada das outras. Não somente pode ser aplicada em colunas cromatográficas, mas também em precipitação, eletroforese e outros métodos de separação. A maioria dos procedimentos é, entretanto, cromatográficos. A cromatografia de afinidade apresenta alta resolução, mas devido ao seu alto custo, é…