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Cromatografias e Eletroforese
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Cromatografia e Eletroforese
1. CROMATOGRAFIA POR EXCLUSÃO MOLECULAR
A cromatografia por exclusão molecular, também chamada filtração em gel, permite a separação de moléculas com base nas diferenças de peso molecular. É um método útil tanto para o fracionamento de moléculas quanto para a determinação de peso molecular. Na cromatografia de exclusão molecular, a mistura de proteínas, dissolvidas em tampão adequado, flui através de uma coluna cheia de esferas microscópicas (contém aberturas e microcanais de tamanhos determinados que permitem a passagem ou retém moléculas de diferentes tamanhos) de um material polimérico altamente hidratado e inerte, previamente lavado e equilibrado com um tampão. As esferas estão disponíveis comercialmente e as mais conhecidas são o Sephadex e a Sepharose, derivados de polissacarídeos, e o Bio-Gel, derivado da poliacrilamida. Quanto mais fino o tamanho de partícula de gel, maior a resolução e menos a vazão da coluna.
Todos eles podem ser preparados com diferentes graus de porosidade interna. Nas colunas, as proteínas de diferentes tamanhos moleculares penetram nos poros internos das esferas em graus variados, percorrendo desta forma a coluna com velocidades específicas. Moléculas protéicas muito grandes não podem penetrar nos poros das esferas e, assim, permanecem no volume excluído da coluna, definido como o volume da fase aquosa que está na parte externa das microesferas. As moléculas pequenas, por penetrarem livremente nos poros das microesferas, têm seu percurso retardado. Como as moléculas menores têm que passar por um volume efetivamente…
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