INVESTIGA!O DA OCORR?CIA DE LECTINAS NA ESP?IE Sideroxylon obtusifolium ATRAV? DE ENSAIOS DE HEMOAGLUTINA!O E INIBI!O POR CARBOIDRATO

A atividade hemaglutinante (AH) foi efetuada em placas de microtitulação onde serão colocados 50 ml de NaCl 0,15 M. Em seguida, 50 ml de amostra lectínica foram adicionadas ao segundo poço procedendo-se diluições sucessivas, ao término dos quais serão adicionados 50 ml da suspensão de eritrócitos. O primeiro poço funcionou como controle. A placa foi mantida em repouso, durante 45 min, em temperatura ambiente e a AH foi definida como o inverso do Título correspondente a maior diluição em que se observa aglutinação (diferente do controle).

6.6- Determinação de inibição de atividade hemaglutinante

A inibição da atividade hemaglutinante (AH) foi realizada em placas de microtitulação, onde as soluções de inibidor compostas dos carboidratos (N-acetil-D-glicosamina, D-arabinose, D-manose, L-fucose, L-rafinose, D-galactose, D-frutose, D-glicose, sacarose, L-raminose, L-celobiose, lactose, L-trealose, D-xilose, metil-±-D-glucopiranosídeo e metil-±-D-manopironosídeo solubilizados em NaCl 0,15 M para uma concentração final de 200 mM) e das glicoproteínas (tireoglobulina, asialofetuína, ovoalbumina, fetuína, azocazeína, soro bovino e soro de coelho na concentração de 1mg/ml em NaCl 0,15 M) foram utilizadas na substituição do NaCl 0,15 M do ensaio descrito no item 4.1.4. Após o preparo das soluções inibidoras e suas diluições (200 mM a 25 mM - 0,5 mg/ml a 0,25 mg/ml), foram adicionados 50 µl em todos os poços exceto no segundo onde fora acrescentados 50 µl da solução não diluída. Em seguida, a partir do poço sem diluição foram adicionados 50 µl da amostra…