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PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS
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PURIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS
Devido a variação de tamanho e de composição química existentes entre os polipeptídeos torna-se fácil a tarefa de escolher um método para separar as proteínas uma das outras. A purificação de proteínas não é um processo fácil, em geral uma substância que participa de menos de 0,1% do peso de um tecido seco é purificado até aproximadamente 98% de pureza. Com essa dificuldade de purificar proteínas em baixas concentrações, as primeiras a serem purificadas foram as encontradas em abundância e as fáceis de isolar, como é o caso da hemoglobina que participar de um terço da massa dos glóbulos vermelhos. O primeiro passo para isolar uma proteína é remove-la da célula e colocá-la em solução. A maioria do procedimentos para romper as células usa algum tipo de esmagamento ou moagem, seguido por filtração ou centrifugação para remover as partículas insolúveis maiores. Se a proteína estiver fortemente associada a membrana lipídica, poderá ser usado para solubilizar os lipídios um detergente ou solvente orgânico, liberando a proteína.
Uma vez removida a proteína do seu ambiente natural, ela fica exposta a muitos reagentes que podem danifica-la de forma irreversível. Tais influências devem ser cuidadosamente controladas em todo o processo de purificação. Os fatores que devem ser considerados durante todo o processo são: PH, temperatura, presença de enzimas degradativas, adsorsão às substâncias e armazenamento por muito tempo.
Purificar uma certa substância requer…
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