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Estudo Funcional de Mutantes da Proteína Prion Celular Associados à Doenças por Prion
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The effect of Ln `)`1 peptide on intracellular Ca2+ increase was completely blocked by PLC (U73122, 1f,LM) and InsP3 receptor (2APB, 50 f,LM) inhibitors (P<0.05; Fig. 3C, F), whereas an inactive analog of U73122 (U73343, 1 f,LM) had no effect on intracellular Ca2+ release (data not shown). These results indicated that PrPC- Ln `)`1 peptide interaction mobilized Ca2+ from the ER by PLC-mediated activation of the InsP3 receptor, and that the release of ER Ca2+ stores was required for the observed extracellular Ca2+ influx in response to treatment with the Ln `)`1 peptide (Fig. 3A, F).
Once mobilized from intracellular stores, calcium can activate SOCs in the plasma membrane, and the opening of these channels leads to Ca2+ influx from the extracellular medium by a mechanism called capac- itative calcium entry (CCE) (28). To identify the type of plasma membrane channel involved in the PrPC-Ln `)`1 peptide-evoked calcium influx, we incubated hip-
Figure 2. Ln `)`1 peptide binding to PrPC in- duced sequential activation of PLC, PKC, and ERK1/2. Primary hippocampal neurons from Prnp+/+ mice were treated with Ln `)`1 peptide (37 f,LM), either with or without (ctr) PKC (0.5 f,LM BIM), PKA (60 nM Kt) ERK1/2 (10 f,LM
U0), or PLC (1 f,LM U73) inhibitors. Cultures were also treated with either a peptide where the KDI domain of the Ln `)`1 peptide was substituted by 3 glycines (GGG, 37…
Once mobilized from intracellular stores, calcium can activate SOCs in the plasma membrane, and the opening of these channels leads to Ca2+ influx from the extracellular medium by a mechanism called capac- itative calcium entry (CCE) (28). To identify the type of plasma membrane channel involved in the PrPC-Ln `)`1 peptide-evoked calcium influx, we incubated hip-
Figure 2. Ln `)`1 peptide binding to PrPC in- duced sequential activation of PLC, PKC, and ERK1/2. Primary hippocampal neurons from Prnp+/+ mice were treated with Ln `)`1 peptide (37 f,LM), either with or without (ctr) PKC (0.5 f,LM BIM), PKA (60 nM Kt) ERK1/2 (10 f,LM
U0), or PLC (1 f,LM U73) inhibitors. Cultures were also treated with either a peptide where the KDI domain of the Ln `)`1 peptide was substituted by 3 glycines (GGG, 37…
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