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Estudo Funcional de Mutantes da Proteína Prion Celular Associados à Doenças por Prion
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MATERIALS AND METHODS
Peptides and chemicals
Ln `)`1 peptide (RNIAEIIKDI) linked to BSA, Ln `)`1 peptide where KDI domain was changed to GGG (RNIAEIIGGG), and Ln `)`1 scrambled (SCR) peptide (IRADIEIKID) and calden- drina (RDIRRIIRDV) peptide were synthesized by GenScript Corp. (Piscataway, NJ, USA) and NeoMPS SA (Strasbourg, France). MAPK/extracellular signal-regulated kinase (ERK) kinase (MEK) inhibitor 1,4-diamino-2,3-dicyano-1,4-bis (2- aminophenyltio) butadiene (U0126) was obtained from Pro- mega (Madison, WI, USA), PKA inhibitor KT5720, PKC inhibitors chelerythrine chloride (CHE) and bisindolylmale- imide I (BIM), PLC inhibitor U73122, phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), and phosphodiesterase inhibitor 3-isobu- tyl-1-methylxanthine (IBMX) were obtained from Calbio- chem (La Jolla, CA, USA). The PKA activator (forskolin) and the PKC activator (PMA) were purchased from LC Laborato- ries (Woburn, MA, USA). The L-type calcium channel blocker (nifedipine), InsP3 receptor blocker 2-aminoethoxy- diphenyl borate (2APB), Ca2+ ATPase inhibitor [thapsigar- gin (THG)], and bradykinin (BK) B2 receptor antagonist (HOE 140) were from Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). The Q-type Ca2+ channel blocker w-conotoxin MCVII was from Latoxan (Valence, France). Store-operated channel (SOC) inhibitor (SKF 96365), the group I metabotropic agonist s(S)-3,5-dihydroxyphenylglycine (DHPG) or quisqual- ate (QUI), mGluR1 inhibitor (LY367385), and mGluR5 blocker 2-methyl-6-(phenylethynyl)-pyridine (MPEP)…
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Ln `)`1 peptide (RNIAEIIKDI) linked to BSA, Ln `)`1 peptide where KDI domain was changed to GGG (RNIAEIIGGG), and Ln `)`1 scrambled (SCR) peptide (IRADIEIKID) and calden- drina (RDIRRIIRDV) peptide were synthesized by GenScript Corp. (Piscataway, NJ, USA) and NeoMPS SA (Strasbourg, France). MAPK/extracellular signal-regulated kinase (ERK) kinase (MEK) inhibitor 1,4-diamino-2,3-dicyano-1,4-bis (2- aminophenyltio) butadiene (U0126) was obtained from Pro- mega (Madison, WI, USA), PKA inhibitor KT5720, PKC inhibitors chelerythrine chloride (CHE) and bisindolylmale- imide I (BIM), PLC inhibitor U73122, phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), and phosphodiesterase inhibitor 3-isobu- tyl-1-methylxanthine (IBMX) were obtained from Calbio- chem (La Jolla, CA, USA). The PKA activator (forskolin) and the PKC activator (PMA) were purchased from LC Laborato- ries (Woburn, MA, USA). The L-type calcium channel blocker (nifedipine), InsP3 receptor blocker 2-aminoethoxy- diphenyl borate (2APB), Ca2+ ATPase inhibitor [thapsigar- gin (THG)], and bradykinin (BK) B2 receptor antagonist (HOE 140) were from Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). The Q-type Ca2+ channel blocker w-conotoxin MCVII was from Latoxan (Valence, France). Store-operated channel (SOC) inhibitor (SKF 96365), the group I metabotropic agonist s(S)-3,5-dihydroxyphenylglycine (DHPG) or quisqual- ate (QUI), mGluR1 inhibitor (LY367385), and mGluR5 blocker 2-methyl-6-(phenylethynyl)-pyridine (MPEP)…
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