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Dissertação de Mestrado
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Figura 11: Soluções usadas para o preparo da curva de calibração para análise de Açúcares Redutores (AR). (Foto do autor).
3.4.1.3 Açúcares não redutores (ANR) As concentrações de açúcares não redutores foram estimadas por diferença entre o valor obtido na dosagem de AST pelo valor obtido na dosagem de AR.
3.4.1.4 Amido Os teores amido foram determinados pelo método da antrona (Passos, 1996), onde para o preparo dos extratos utilizou-se o pelet resultante do preparo do extrato para AST. O pelet foi seco por 24h em estufa a 45ºC e a este se efetuou a extração do amido por 15 minutos em 10 volumes de hidróxido de sódio 0,5N (p/v). Centrifugou-se o extrato a 1.000 x g por 15min, a temperatura ambiente (25 °C), em centrifuga marca Hettich, modelo universal 32R, e reteve-se o sobrenadante. O procedimento de preparo e quantificação das amostras de leitura e das soluções padrões da curva de calibração seguiu o mesmo protocolo utilizado para analise de AST (item 3.4.1.1), porém a diluição da amostra para análise foi preparadas adicionando-se 10 µL do extrato em 395 µL água ultrapura (Milli-Q).
3.4.2 Proteínas Totais (PT) O preparo dos extratos para a análise de proteínas solúveis totais, foi feito utilizando-se amostras de 10 mg de material seco e moído ao qual foi adicionados 20 volumes, do peso da amostra seca, de tampão fosfato de potássio 0,1 M, pH 6,8, homogeneizado e centrifugado a 14.000 rpm por 15 min, a temperatura de 4°C, em centrifuga marca Hettich, modelo universal 32R. O sobrenadante foi guardado e este foi então utilizado para a…
3.4.1.3 Açúcares não redutores (ANR) As concentrações de açúcares não redutores foram estimadas por diferença entre o valor obtido na dosagem de AST pelo valor obtido na dosagem de AR.
3.4.1.4 Amido Os teores amido foram determinados pelo método da antrona (Passos, 1996), onde para o preparo dos extratos utilizou-se o pelet resultante do preparo do extrato para AST. O pelet foi seco por 24h em estufa a 45ºC e a este se efetuou a extração do amido por 15 minutos em 10 volumes de hidróxido de sódio 0,5N (p/v). Centrifugou-se o extrato a 1.000 x g por 15min, a temperatura ambiente (25 °C), em centrifuga marca Hettich, modelo universal 32R, e reteve-se o sobrenadante. O procedimento de preparo e quantificação das amostras de leitura e das soluções padrões da curva de calibração seguiu o mesmo protocolo utilizado para analise de AST (item 3.4.1.1), porém a diluição da amostra para análise foi preparadas adicionando-se 10 µL do extrato em 395 µL água ultrapura (Milli-Q).
3.4.2 Proteínas Totais (PT) O preparo dos extratos para a análise de proteínas solúveis totais, foi feito utilizando-se amostras de 10 mg de material seco e moído ao qual foi adicionados 20 volumes, do peso da amostra seca, de tampão fosfato de potássio 0,1 M, pH 6,8, homogeneizado e centrifugado a 14.000 rpm por 15 min, a temperatura de 4°C, em centrifuga marca Hettich, modelo universal 32R. O sobrenadante foi guardado e este foi então utilizado para a…
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