Atividade Funcional da Proteína Prion Celular com o Polimorfismo N171S e a Mutação D178N Presentes no Domínio de Ligação à Lâmina

Publicado em 21/08/2014

 

 

 

 

 

 

 

 

Legenda: 100pb (marcador molecular de 100 pares de bases); Contr. (Vetor não digerido); 1 (GFP-PrPC  tipo selvagem); 2 (GFP-PrPC  129V); 3 (GFP-PrPC  129M/171S); 4 (GFP-PrPC

129V/171S); 5 (GFP-PrPC 129M/178N); 6 (GFP-PrPC 129V/178N).

 

Figura 13 - Digestão diagnóstica dos mutantes com EcoRI e BamHI para a liberação do inserto de PrPC.

 

 

Em cada construção verificamos a seqüência correta dos sítios de restrição, a direção do inserto no plamídeo e sua correta inserção, de modo que a ligação no vetor não causasse mudanças na leitura das trincas de bases no inserto.

Comparando o mapa do vetor com os seqüenciamentos dos pontos onde o inserto de PRNP clonado foi inserido em pEGFP (Figura 10), vemos o correto posicionamento dos sítios de restrição das enzimas EcoRI e BamHI, confirmando o  resultado encontrado  na reação  de digestão diagnóstica.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Figura 14 - Eletroferogramas representativos dos seqüenciamentos dos pontos de restrição para as enzimas…

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