MÉTODOS PARA ESTUDO DAS CÉLULAS

INTRODUÇÃO

Os métodos para estudo das células são bastante diversificados e o conhecimento sobre elas progridem com o aperfeiçoamento das técnicas de estudo.

Somos levados a novas descobertas cada vez que aparece um novo instrumento de trabalho ou o aperfeiçoamento de um já utilizado.

O estudo da célula começou através do microscópio óptico (eficiente, mas limitado).

Com o surgimento do microscópio eletrônico, houve um grande impulso para o conhecimento das funções celulares. Sua influência foi tão grande que levou a uma revisão dos conceitos morfológicos de seus constituintes (tanto que, hoje a forma e a estrutura das organelas são descritas conforme nele aparecem).

Muitos outros instrumentos e técnicas de estudo como cultura de células, radioautografia, o microscópio de fluorescência, o microscópio eletrônico de varredura, técnicas de criofratura e bioquímicas, ou seja, todo o arsenal técnico disponível, contribuiu para ampliar o estudo das células.

Os conhecimentos sobre as células progridem paralelamente ao aperfeiçoamento dos métodos de investigação. Inicialmente, o microscópio óptico possibilitou o descobrimento das células e a elaboração da teoria de que todos os seres vivos são constituídos por células.

Posteriormente foram descobertas técnicas citoquímicas que possibilitaram a identificação e a localização de diversas moléculas constituintes das células. Com o advento dos microscópios eletrônicos, que têm grande poder de resolução, foram observados pormenores da estrutura celular que não poderiam sequer ser imaginados pelos estudos feitos com o microscópio óptico.

FIXAÇÃO

Embora seja possível o estudo microscópico de células vivas, muitas vezes há vantagem em obter um preparado permanente (lâmina) no qual as células ficam preservadas, isto é, fixadas e coradas para melhor demonstrar seus componentes.

Todos os preparados apresentam artefatos que são alterações produzidas nas células pelas técnicas utilizadas.
A primeira etapa na preparação de uma amostra para exame ao microscópio é a fixação. Suas finalidades são de evitar a destruição das células por suas próprias enzimas (a autólise), evitar a proliferação e atividades de bactérias, endurecer as células para que resistam às etapas seguintes, aumentar a afinidade das estruturas celulares pelos corantes utilizados na microscopia óptica e aumentar o contraste na microscopia eletrônica.

Numerosas substâncias químicas e misturas são utilizadas como fixadores, um dos melhores e mais utilizado é o formaldeído.

Cada um dos fixadores simples apresenta certos inconvenientes, ao lado de algumas qualidades desejáveis. Por isso foram elaboradas as misturas fixadoras que contém proporções variáveis dos fixadores simples com a finalidade de compensar-lhes as deficiências.

MICROTOMIA

Em sua maioria as células fazem parte de tecidos que precisam ser cortados em fatias finas. Para obtenção dos cortes a serem estudados nos microscópio óptico, os tecidos devem ser embebidos e envolvidos por uma substância de consistência firme. As mais usadas são a parafina e as resinas plásticas.

Depois de protegidos e envolvidos nesse material o tecido é colocado em um instrumento (aparelho) de corte chamado Micrótomo, nele o tecido influído é seccionado por uma navalha, obtendo-se geralmente cortes de 1 a 6 µm de espessura. Para o microscópio Óptico é usado o corte com navalhas de aço.

Os cortes são colocados sobre uma lâmina com pequena quantidade de albumina que serve como adesivo. Neste ponto as amostras ainda não estão prontas para o exame ao microscópio, já que o tecido está impregnado com parafina e o corte é incolor. Remove-se então a parafina, e o tecido é reidratado, sendo em seguida corado.

Quando se deseja estudar lipídios, evita-se o emprego de solventes graças ao uso do Micrótomo de congelação, no qual o tecido é endurecido por congelação,o que permite seu corte. Este tipo de micrótomo e outro tipo mais elaborado e mais eficiente denominado Criostato, permitem a obtenção rápida de cortes, sem passar pelas etapas de quando se usa a parafina. São muito utilizados