Caracterização de Aminoácidos de Proteínas

Jequié – Bahia

Setembro de 2006

Introdução

Os aminoácidos são compostos que apresentam obrigatoriamente dois grupos funcionais distintos, um grupo amina e um grupo carboxilo, podendo, no entanto, apresentar outros grupos funcionais ao longo das suas cadeias carbonatas. Estas moléculas, geralmente de pequenas dimensões, são de grande importância para a manutenção dos processos químicos inerentes à vida, principalmente quando associados entre si sob a forma de péptidos ou de proteínas.

As proteínas podem apresentar interações entre os seus resíduos de aminoácidos (ligações de hidrogênio, por exemplo) ao nível das cadeias laterais, o que lhes confere geralmente uma estrutura globular, responsável pela sua função no interior da célula. Quando ocorrem modificações nessa estrutura a proteína pode perder a capacidade de exercer a sua função, ficando inativa - este processo designa-se por desnaturação de proteínas.

A desnaturação provoca a ruptura de ligações não covalentes e pode ter origem em processos físicos ou químicos.

As proteínas são normalmente insolúveis até se atingirem temperaturas que rondam os 40ºC. Quando se atingem valores superiores a 50ºC as proteínas ficam muito instáveis e degradam-se formando um precipitado irreversível, pelo que as proteínas não retomam a sua estrutura inicial. A desnaturação por mudança de pH ocorre por modificação da carga evidenciada pela proteína. No ponto isoelétrico a proteína não apresenta carga, não ocorrendo repulsões entre as partículas, que se aglutinam e precipitam. Quando o pH é superior ou inferior ao verificado para o ponto isoelétrico as proteínas apresentam carga, o que se traduz, quando em solução, em repulsões, e consequentemente numa maior solubilidade.

Existem várias reações que caracterizam aminoácidos e as proteínas, tendo-se a possibilidade, pela diferença da reação, de identificar a natureza de uma substância desconhecida, caso esta seja de natureza protéica.

A primeira reação realizada é característica da presença de aminas primárias (apenas presentes em aminoácidos) e designa-se por reação da ninhidrina (hidrato de triceto-hidrindeno). Como produto obtém-se um composto azul-violeta em quantidades proporcionais ao teor de aminoácido que reagiu.

A reação do Biureto é indicada pela presença de ligações peptídicas formando-se um complexo de cor violeta. É uma reação quantitativa (marca a concentração do reagente). Para se preparar o reagente de Biureto, pesa-se 1,5g de sulfato de cobre cristalizado, 6,0 g de tartarato duplo de sódio e potássio e 500 mL de água destilada. Adiciona-se 300 mL de hidróxido de sódio 10% em constante agitação e por fim, completar volume para 1 litro com água destilada. Filtrar se houver necessidade.

Objetivo

Identificar a presença de aminoácido e proteínas

Caracterizar a presença de proteínas nas amostras

Material e Reagentes

Materiais:

• Becker
• Tubos de ensaio
• Bastão de vidro
• Manta de aquecimento
• Pipetas de descartáveis de 0,5 e de 5 mL
• Pipetas graduadas
• Pipeta Pasteur
• Banho Maria fervente

Reagentes:

• Sol. De glicina a 0,25%
• Sol. De ovoalbumina a1%
• Água destilada
• Leite desnatado
• Mel
• Suco de laranja (in natura)

Procedimento

Reação de Ninhidrina:

1 - Preparou-se 6 tubos de ensaios devidamente numerados.

2 - Colocou-se 2 ml de solução do composto a ser analisado conforme a tabela a seguir:

3 - Depois se acresceu 5 gotas de solução de ninhidrina.

4 - Homogeneizou-se.

5 - Aqueceu-se os tubos em banho Maria fervente até que se overvou a coloração azul arroxeada nos controles positivos.

6 - Retirou os tubos do banho Maria

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